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呕吐毒素免疫亲和柱操作说明书
【概要】
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol， DON) 又称呕吐毒素(vomitoxin)，主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种。广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。DON最明显的毒性作用是引起呕吐、腹泻、腹痛等症，并延缓生长、降低免疫机能，与贫血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切联系。给人、家畜的健康造成巨大威胁。
【适用范围及性能】
用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇时的样品前处理。
柱容量：≥500ng
回收率：≥80%
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，脱氧雪腐镰刀菌烯醇与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱脱氧雪腐镰刀菌烯醇，然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】
根据不同规格，每一个盒中包含5/25支脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱及1份说明书。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
┅┅高速均质器或组织匀浆机
┅┅粉碎机
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：单道 100μl～1000μl
┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸）
┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5μm孔径）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃试管
┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）
试剂：
┅┅蒸馏水或去离子水
┅┅聚乙二醇（PEG）2000
┅┅色谱级甲醇
┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS）：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL
【样本处理步骤】
（一）花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料（稀释倍数4）
┅┅称取25g粉碎的样品，加入10g聚乙二醇8000后，用去离子水定容；
┅┅转移至均质杯中，均质器高速均质2分钟；
┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤，取上清液，使用玻璃纤维滤纸过滤后待用；
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取2mL上述样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/s流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去离子水快速淋洗柱子1次，流速为2-3滴/秒。弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
（二）酒类（稀释倍数0.5）
┅┅取脱气酒类试样(含二氧化碳的酒类样品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，过滤或超声脱气)或其他不含二氧化碳的
酒类试样20g(精确到0.01g)，加人1g聚乙二醇(4.3)，用水定容至25.0mL，混匀。
┅┅用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取2mL上述样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/s流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去离子水快速淋洗柱子1次，流速为2-3滴/秒。弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。也可氮气吹干后，复溶以提升浓度（稀释倍数相应变化）。
【注意事项】
┅┅呕吐毒素危害很大，应戴手套操作。
┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：亲和柱可于常温保存，2-8℃储存可延长有效期，不可冻存
保存期：该产品有效期为12个月。
