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玉米赤霉烯酮免疫亲和柱操作说明书
【概要】
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)又称F-2毒素，是玉米赤霉菌的代谢产物，具有类雌激素样作用，具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。
【适用范围及性能】
用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的玉米赤霉烯酮时的样品前处理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，玉米赤霉烯酮单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的玉米赤霉烯酮经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，玉米赤霉烯酮与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】
根据不同规格，每一个盒中包含5-25支玉米赤霉烯酮免疫亲和层析柱及1份说明书。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
┅┅高速均质器或组织匀浆机
┅┅粉碎机
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：单道 100l～1000l
┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸）
┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5m孔径）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃试管
┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）
试剂：
┅┅甲醇（色谱级）
┅┅蒸馏水或去离子水
┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲液）：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL
【试剂配制】
样品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作为样品提取液
【样本处理步骤】
（一）花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料
┅┅称取50g粉碎的样品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化钠，以样品提取液定容。
┅┅转移至均质杯中，在均质器上高速搅拌，提取2分钟；
┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤
┅┅取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测；
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去离子水依次淋洗柱子1次，流速约为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
（二）啤酒，黄酒等酒类
┅┅取10mL试样脱气后与90mLPBS缓冲液混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测；
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去离子水依次淋洗柱子1次，流速约为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1ml洗脱液中的玉米赤霉烯酮含量相当于1g样品中玉米赤霉烯酮含量。
【注意事项】
┅┅玉米赤霉烯酮危害很大，应戴手套操作。
┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：亲和柱可于常温保存，2-8℃储存可延长有效期，不可冻存
保存期：该产品有效期为12个月。
